CRNDE, a long-noncoding RNA, promotes glioma cell growth and invasion through mTOR signaling

日期：2017-07-14 標(biāo)簽：LncRNA,CRNDE,histone,acetylation

組蛋白乙?；芯堪咐ㄒ唬?/span>

（一）調(diào)控通路：

（二）實驗流程：

作者首先用Q-PCR檢測臨床樣本神經(jīng)膠質(zhì)瘤/癌旁組織細胞的LncRNA表達，然后分析LncRNA CRNDE轉(zhuǎn)錄本。作者從功能和機制兩方面研究LncRNA CRNDE。（1）LncRNA CRNDE的功能是促進癌細胞生長：通過建立CRNDE過表達/敲低穩(wěn)定株進行CCK8實驗、劃痕實驗、Transwell、小鼠體成瘤實驗檢測CRNDE功能。（2）調(diào)控機制研究：首先用WB方法檢測正常細胞和膠質(zhì)瘤細胞的mTOR通路相關(guān)蛋白的表達，然后用P300/CBP抑制劑處理細胞作為對照，WB檢測CRNDE敲低后的P70S6K的磷酸化說明CRNDE促進P70S6K的磷酸化。之后，作者用CHIP實驗檢測CRNDE啟動子與組蛋白成分以及P300/CBP的結(jié)合情況來說明P300/CBP結(jié)合到啟動子上促進組蛋白乙酰化，最后通過檢測P300/CBP敲低后CRNDE的表達說明P300/CBP促進CRNDE的表達。

（三）核心FIGURE:

Figure1說明的是LncRNA CRNDE的啟動子被p300乙?；?。

A、 CHIP實驗，用P300抗體從癌細胞U87MG和非癌細胞NHA釣取與P300結(jié)合的DNA片段，Q-PCR檢測表明LncRNA CRNDE啟動子與P300結(jié)合在癌細胞中比非癌細胞明顯增多。

B、 ChIP實驗，分別用甲基化和乙?；鞍卓贵w釣取DNA片段，結(jié)果表明癌細胞的LncRNA CRNDE啟動子乙?；黾?。

C、 Q-PCR檢測細胞中LncRNA CRNDE的表達，si-P300的細胞LncRNA表達量明顯下降。

Figure2說明的是LncRNA CRNDE通過P70S6的磷酸化激活mTOR信號通路調(diào)控腫瘤基因相關(guān)基因和抑癌因子的表達

A、 Western Blot檢測癌細胞和非癌細胞中P70S6和其磷酸化情況。

B、 用Western Blot檢測受mTOR抑制劑處理后的P70S6的磷酸化，然后用Q-PCR檢測c-myc、cyclinD1、p53、PTEN基因的表達，結(jié)果是mTOR抑制后P70S6磷酸化下降，癌細胞增殖相關(guān)基因c-myc、cyclinD1表達下降，抑癌因子表達升高。

C、 用Western Blot檢測sh-CRNDE的P70S6的磷酸化，然后用Q-PCR檢測c-myc、cyclinD1、p53、PTEN基因的表達，結(jié)果與使用mTOR抑制劑處理一致。

本公司可提供的技術(shù)服務(wù)項目

本公司可進行以上類似實驗的實驗設(shè)計及整體實驗外包項目，包括CHIP、慢病毒穩(wěn)轉(zhuǎn)株的建立（過表達/敲低）、q-pcr、WB，其中CHIP為本公司主營項目。

一、CHIP技術(shù)：主要研究蛋白與基因啟動子之間的關(guān)系

本實驗分別用P300和PolII抗體從癌細胞U87MG和非癌細胞NHA釣取與P300、PolII結(jié)合的DNA片段，q-pcr檢測表明癌細胞的LncRNA CRNDE啟動子與P300結(jié)合與非癌細胞相比明顯增多。

參考文獻：Yunliang Wang, Yutong Wang,Jinfeng Li，et al. CRNDE, a long-noncoding RNA, promotes glioma cell growth and invasion through mTOR signaling［J］.Canlet.2015,03,027