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基因表達調控實驗技術
基因表達調控實驗技術
基因表達調控一般分為轉錄前的調控、轉錄過程的調控和轉錄后調控。轉錄前的調控包括基因組DNA的修飾和組蛋白的修飾,這里可能涉及到修飾酶與啟動子互作、LncRNA與修飾酶與啟動子的互作,可以通過CHIP、RIP、co-IP、RNA pull down、DNA pull-down等實驗技術進行驗證;轉錄過程的調控包括轉錄因子或轉錄抑制因子對基因啟動子的作用,LncRNA與轉錄因子互作,LncRNA與基因互作等,這些可以通過啟動子Luciferase活性、CHIP、RIP、CLIP、CHIRP、RNA pull down、DNA pull-down、DNA EMSA、RNA-蛋白FISH等實驗技術進行驗證;轉錄后調控包括LncRNA與mRNA互作、LncRNA與microRNA互作(ceRNA機制)、microRNA與mRNA互作、LncRNA與mRNA結合蛋白互作等,可通過3’-UTR Luciferase活性、RIP、CLIP、RNA pull down、RNA-RNA pull-down、RNA EMSA、RNA-蛋白FISH、RNA-RNA FISH等實驗技術進行驗證。對于一種RNA或蛋白參與的是基因表達調控哪個階段,可以通過核質分離和FISH進行細胞的定位初步確定,位于細胞核的一般參與的是轉錄前和轉錄過程的調控,位于細胞質的一般參與轉錄后的調控。
下面我們將介紹在基因表達調控中所用到的一些關鍵的實驗技術服務項目。
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4、CLIP實驗技術
11、核質分離技術
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